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长期保存菌种的方法?

长期保存菌种的方法?

液体石蜡保存法

液体石蜡保存法就是在斜面菌种或穿刺菌种表面覆盖一层液体石蜡,从而隔绝空气,减少菌种及培养物水分挥发,保藏温度要求在4℃下即可。

将培养好的菌种斜面,缓慢倒入无菌的液体石蜡,使石蜡高出斜面顶端1厘米,直立放置,低温保存就可以,霉菌、放线菌、芽孢细菌可保藏2年以上不死,酵母菌可保藏1-2年。

沙土保存法

沙土保藏法是将菌种吸附在适当的载体上,而后进行干燥的保藏。将培养好的菌种接入沙土管内,用真空泵抽气至干。细菌、酵母菌、丝状真菌均可用此法保藏,前两者可保藏2年左右,有些丝状真菌甚至可保藏14-17年之久。

甘油管保存法

甘油管保存是利用微生物在甘油中生长和代谢受到抑制的原理达到保藏目的。配置30%浓度的无菌甘油,将培养好的菌种与甘油充分混合均匀,放入-20℃保存。

冷冻干燥保藏法

冷冻干燥保存法就是将菌种与保护剂混合均匀后,快速冷冻,然后在减压下利用升华现象除去水分,兼具低温、干燥、除氧三方。干燥后的菌种在真空环境下可长期保存。

长期保存菌种的方法:

1.传代培养保藏法

又有斜面培养、穿刺培养、疱肉培养基培养等(后者作保藏厌氧细菌用),培养后于4-6℃冰箱内保存。

2.液体石蜡覆盖保藏法

是传代培养的变相方法,能够适当延长保藏时间,它是在斜面培养物和穿刺培养物上面覆盖灭菌的液体石蜡,一方面可防止因培养基水分蒸发而引起菌种死亡,另一方面可阻止氧气进入,以减弱代谢作用。

3.载体保藏法

是将微生物吸附在适当的载体,如土壤、沙子、硅胶、滤纸上,而后进行干燥的保藏法,例如沙土保藏法和滤纸保藏法应用相当广泛。

4.寄主保藏法

用于目前尚不能在人工培养基上生长的微生物,如病毒、立克次氏体、螺旋体等,它们必须在生活的动物、昆虫、鸡胚内感染并传代,此法相当于一般微生物的传代培养保藏法。病毒等微生物亦可用其他方法如液氮保藏法与冷冻干燥保藏法进行保藏。

5.冷冻保藏法

可分低温冰箱(-20-30℃,-50-80℃)、干冰酒精快速冻结(约-70℃)和液氮(-196℃)等保藏法。

6.冷冻干燥保藏法

先使微生物在极低温度(-70℃左右)下快速冷冻,然后在减压下利用升华现象除去水分(真空干燥)。