自杀。1935年3月8日,阮玲玉在上海新闸路沁园村的住宅服安眠药自尽。
上海老作家沈寂为编写阮玲玉的电视资料片,查阅浩如烟海的史料,意外地发现了一份阮玲玉去世一个半月后出版的《思明商学报》,上面刊登了两封阮玲玉遗书。一封是写给从少女时代就霸占阮玲玉的张达民的,对他的无耻行为进行强烈谴责;第二封写给占有阮玲玉前后玩弄过多位女影星的唐季珊,控诉他是“玩弄女性的恶魔”,并说自己被迫选择一条绝路,是因为“没有你迷恋‘××’,没有你那晚打我,今晚又打我,我大约不会这样做吧!”遗书中的“××”,是指唐季珊占有阮玲玉之后又勾引上的歌舞明星梁赛珍。《思明商学报》在发表阮玲玉遗书的同时刊登文章,说明提供这两封真实遗书的正是梁赛珍姐妹。文中揭露,阮玲玉自尽后,唐季珊畏于社会压力,竟要梁赛珍的妹妹梁赛珊代笔,伪造了两封阮玲“遗书”,并以“人言可畏”的托辞,将他虐待阮玲玉致死的罪责推向社会。阮玲玉的临终绝笔,使梁赛珍姐妹认清了唐季珊的嘴脸,出于良心,她们决定公开阮玲玉的真实遗书。
阮玲玉在25年的短暂生命中,主演了29部电影,其中《三个摩登女性》《城市之夜》《小玩意》《神女》《新女性》等影片,被认为是中国早期电影的经典之作。