氯化血红素的制备及分析

氯化血红素的制备及分析 本文关键词：血红素，制备，氯化，分析

氯化血红素的制备及分析 本文简介：氯化血红素的制备及分析

一、实验目的

1、掌握氯化血红素制备的原理。

2、了解血红素的药用价值。

二、实验原理血红素是高等动物血的红色素，由原卟啉与Fe2+结合而成，它与珠蛋白结合成血红蛋白。在体内的主要生理功能是载氧，帮助呼出CO2，另外它还是ctyP450、ctyc、过氧化酶的辅基。血红素不溶于水，溶于

氯化血红素的制备及分析 本文内容：

氯化血红素的制备及分析

一、实验目的

1、掌握氯化血红素制备的原理。

2、了解血红素的药用价值。

二、实验原理

血红素是高等动物血的红色素，由原卟啉与Fe2+结合而成，它与珠蛋白结合成血红蛋白。

在体内的主要生理功能是载氧，帮助呼出CO2，另外它还是cty

P450、cty

c、过氧化酶的辅基。

血红素不溶于水，溶于酸性丙酮及碱性水中，在溶液中易形成聚合物，临床上常用作铁强化剂和抗贫血药及食物中色素添加剂，另外可用于制备原卟啉来治疗癌症。

氯化血红素(hemin)的制备实验室常用酸性丙酮分离提取法，使血球在酸性丙酮中溶血，抽提后再经浓缩、洗涤、结晶得到氯化血红素。

工业上制取氯化血红素常用冰乙酸结晶法，血球用丙酮溶血后，制取血红蛋白，再用冰乙酸提取。

在氯化钠存在下，氯化血红素沉淀析出。

卟啉环系化合物在400nm处有强烈吸收，称Sorel带，最大吸收波长对各种卟啉化合物是特征的，但溶剂对最大吸收波长也有影响，采用0.25%碳酸钠作溶剂。

在600nm处有特征吸收峰，光吸收值与氯化血红素浓度的关系符合朗比定律。

三、实验材料

1、器材

（7）浓盐酸

（8）20%氯化锶

（9）0.25%碳酸钠

四、实验方法

1、酸性丙酮抽提

0.8%柠檬酸三钠抗凝猪血200ml，离心（3000r/min）15min，倾去上层血浆，制得血球，加2-3倍的蒸馏水，充分溶胀后，沸水浴20-30min，纱布过滤，滤渣加入含3%盐酸的丙酮溶液200ml，振摇抽提30min，抽滤，将滤液用旋转蒸发仪浓缩至原体积的1/3-1/4，加入20%氯化锶至终浓度2%，静置15min，离心10min，沉淀用水、95%乙醇、乙醚各洗涤一次，真空干燥后得氯化血红素粗品，称重，计算收率。

2、

冰乙酸结晶法

0.8%柠檬酸三钠抗凝猪血500ml，离心15min，倾去上层血浆，下层红细胞加丙酮200ml搅拌，过滤，得红色血蛋白。

取500ml带温度计、冷凝器、搅拌插口的三颈烧瓶，加入300ml冰乙酸，加热升温，再加入16g氯化钠，8g氯化钾，在搅拌下加入100g血红蛋白，在105℃继续搅拌10min，冷却，静置过夜，离心收集沉淀的氯化血红素结晶，用冰乙酸和0.1%醋酸洗涤，再用水洗至中性，过滤，干燥后的氯化血红素粗品，称重，计算得率。

3、含量测定

取标准氯化血红素，用0.25%碳酸钠配制成浓度0.08mg/ml备用。

取制备所得氯化血红素，用0.25%碳酸钠配制成0.1

mg/ml备用。按下表稀释，在600nm处测定OD，以0.25%碳酸钠溶剂作空白，根据所得数据，计算氯化血红素含量。

标准氯化血红素

制备血红素

0

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

13

Hemin溶液

0

0.4

0.8

1.2

1.6

2.0

2.4

2.8

3.2

3.6

4.0

1.0

2.0

3.0

0.25%碳酸钠(ml)

4.0

3.6

3.2

2.8

2.4

2.0

1.6

1.2

0.8

0.4

0

3.0

2.0

1.0

Hemin含量（mg/ml

0

OD600nm